細胞毒性 Cytotoxicity Test
法規 ISO 10993-5, USP <87>
1. 試驗物質萃取:細胞培養液
2. 試驗細胞株:L929 細胞株
3. 評估項目:
(1)定量分析:以MTT assay 分析加入試驗物質萃取液後第24小時之細胞存活率
(2)定性分析:以中性紅 (Neutral Red) 染色,進行細胞型態判讀
沙門氏桿菌回覆突變試驗 Ames Test
法規 ISO 10993-3, OECD 471
1. 試驗物質萃取:兩種萃取
2. 試驗菌株:Salmonella typhimurium TA97a, TA98, TA100, TA102, TA1535
3. 試驗組別:陰性對照組、陽性對照組、兩種溶劑對照組及兩種萃取液劑量組,共6組。每組三重覆。
4. 測試條件:進行含有及不含有S9 混合物的測試
5. 評估項目:各試驗組別回復突變菌落數分析
小鼠淋巴瘤細胞突變測試 In Vitro Mammalian Cell Gene Mutation Tests Using the Thymidine Kinase Gene
法規 ISO10993-3, OECD 490
1. 試驗物質:兩種萃取
2. 試驗系統:L5178Y/TK+/-細胞
3. 試驗組別:陰性對照組、陽性對照組組、兩種萃取溶劑對照、兩種萃取液劑量組,每組兩重覆。
4. 測試條件:短時間處理(w/ and w/o S9)、長時間處理(w/o S9)
5. 評估項目:細胞突變頻率
小鼠周邊血液微核試驗 Micronucleus test (MN)
法規 ISO10993-3, OECD 471
1. 試驗物質:兩種萃取
2. 試驗系統:小鼠CD-1 (ICR)
3. 試驗組別:陰性對照組、陽性對照組組、兩種萃取溶劑對照、兩種萃取液劑量組
4. 測試條件:以腹腔或尾靜脈注射,執行單一或重覆劑量投藥
5. 評估項目:計算多染性紅血球或網狀紅血球中微核發生的數目
眼刺激試驗 Ocular irritation test
法規 ISO10993-23
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質極性萃取液,非極性萃取液
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:6隻
5. 投予途徑:滴至眼球
6. 投予頻率:一次
7. 試驗期:三天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)刺激性觀察與評分:投藥前及投藥後第1小時、24、48 與 72 小時進行觀察並評分。
皮內刺激試驗 Intracutaneous (intradermal) irritation test
法規 ISO10993-23
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質極性萃取液,非極性萃取液
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:3隻
5. 投予途徑:皮內注射
6. 投予頻率:一次
7. 試驗期:三天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)刺激性觀察與評分:投藥前及投藥後第24、48 與 72 小時進行觀察並評分。
皮膚刺激試驗 Skin irritation test
法規 ISO10993-23
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質極性萃取液,非極性萃取液
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:6隻
5. 投予途徑:皮膚貼附接觸
6. 投予頻率:一次
7. 試驗期:三天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)刺激性觀察與評分:投藥前及投藥後第1小時、24、48 與 72 小時進行觀察並評分。
口腔黏膜刺激試驗 Oral Mucosa irritation test
法規 ISO10993-23
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質極性萃取液,非極性萃取液
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:敘利亞倉鼠
4. 動物隻數:12隻
5. 投予途徑:口腔黏膜接觸
6. 投予頻率:重複接觸四次
7. 試驗期:兩天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)刺激性觀察與評分:接觸前及接觸後第1、2、3、4小時(每小時接觸)與24 小時進行觀察並評分
(3)投予部位組織切片
(4)病理判讀
直腸刺激 Rectal Irritation test
法規 ISO10993-23
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質極性萃取液,非極性萃取液
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:12隻
5. 投予途徑:直腸黏膜接觸
6. 投予頻率:五次 (每天一次,共五天)
7. 試驗期:六天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)刺激性觀察與評分:試驗前及每日接觸後與試驗結束後24 小時進行觀察並評分
(3)投予部位組織切片
(4)病理判讀
陰道刺激 Vaginal Irritation test
法規 ISO10993-23
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質極性萃取液,非極性萃取液
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:12隻
5. 投予途徑:陰道黏膜接觸
6. 投予頻率:五次 (每天一次,共五天)
7. 試驗期:六天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)刺激性觀察與評分:接觸前及每日接觸後與試驗結束後24小時進行觀察並評分
(3)投予部位組織切片
(4)病理判讀
陰莖刺激 Penile Irritation test
法規 ISO10993-23
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質極性萃取液,非極性萃取液
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:12隻
5. 投予途徑:陰莖接觸
6. 投予頻率:重複接觸四次
7. 試驗期:三天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)刺激性觀察與評分:試驗前與試驗結束後1、24、48 小時進行觀察並評分
(3)投予部位組織切片
(4)病理判讀
22天兔眼配戴試驗 22-day Ocular Irritation Test
法規 ISO 9394
1. 試驗物質:隱形眼鏡直接配戴
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質
對照組-對照物質
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:6隻
5. 投予途徑:眼球接觸
6. 投予頻率:每日
7. 試驗期:二十二天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)每天觀察動物狀況、試驗物質狀況,定期螢光觀察與裂隙燈觀察
(3)投予部位組織切片
(4)病理判讀
極大化敏感試驗 Skin Sensitization Study (Maximization Test)
法規 ISO10993-10
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質極性萃取液,非極性萃取液
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:天竺鼠
4. 動物隻數:30隻
5. 投予途徑:皮內注射、皮膚貼附
6. 試驗期:三十天 (不含檢疫及適應期)
7. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)刺激性觀察與評分:試驗期間與試驗結束後24、48 小時進行觀察並評分。
急性系統毒試驗 Acute Systemic Toxicity Study
法規 ISO10993-11
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
試驗組-試驗物質極性萃取液,非極性萃取液
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:ICR 小鼠
4. 動物隻數:20隻
5. 投予途徑:尾靜脈注射及腹腔注射
6. 投予頻率:一次
7. 試驗期:四天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)毒性觀察與評分:每天觀察外觀與表現,每天記錄體重變化。
亞急性系統毒試驗 Subacute Systemic Toxicity Study
法規 ISO10993-11
1. 試驗組別:
試驗組-試驗物質
對照組-對照物質
2. 試驗動物:SD 大鼠
3. 動物隻數:20隻(10公10母)
4. 投予途徑:(瑞德生技專業評估)
5. 投予頻率:(瑞德生技專業評估)
6. 試驗期:24小時至28天 (瑞德生技專業評估)
7. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)毒性觀察與評分:每天觀察外觀與表現,每週記錄攝食與體重變化,犧牲後解剖觀察
(3)血清生化分析
(4)血液分析
(5)尿液分析
(6)組織切片
(7)病理判讀
亞慢性系統毒試驗 Subchronic Systemic Toxicity Study
1. 試驗組別:
試驗組-試驗物質
對照組-對照物質
2. 試驗動物:SD 大鼠
3. 動物隻數:40隻(20公20母)
4. 投予途徑:(瑞德生技專業評估)
5. 投予頻率:(瑞德生技專業評估)
6. 試驗期: (瑞德生技專業評估)
7. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)毒性觀察與評分:每天觀察外觀與表現,每週記錄攝食與體重變化,犧牲後解剖觀察
(3)血清生化分析
(4)血液分析
(5)尿液分析
(6)組織切片
(7)病理判讀
慢性系統毒試驗 Chronic Systemic Toxicity Study
法規 ISO10993-11
1. 試驗組別:
試驗組-試驗物質
對照組-對照物質
2. 試驗動物:SD 大鼠
3. 動物隻數:60隻(30公30母)
4. 投予途徑:(瑞德生技專業評估)
5. 投予頻率:(瑞德生技專業評估)
6. 試驗期:6-12個月 (瑞德生技專業評估)
7. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)毒性觀察與評分:每天觀察外觀與表現,每週記錄攝食與體重變化,犧牲後解剖觀察
(3)血清生化分析
(4)血液分析
(5)尿液分析
(6)組織切片
(7)病理判讀
雙投與亞慢性系統毒試驗 Subchronic Systemic Toxicity Study (Dual routes of parenteral administration)
法規 ISO10993-11, Annex H
1. 試驗物質萃取:兩種萃取 (polar and non-polar)
2. 試驗組別:
對照組-極性萃取溶劑,非極性萃取溶劑
3. 試驗動物:SD 大鼠
4. 動物隻數:24隻(12公12母)
5. 投予途徑:尾靜脈注射及腹腔注射
6. 投予頻率:尾靜脈14次(每日投予) 腹腔注射5次(每三日投予)
7. 試驗期:十四天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)毒性觀察與評分:每天觀察外觀與表現,每週記錄攝食與體重變化,犧牲後解剖觀察
(3)血清生化分析
(4)血液分析
(5)尿液分析
(6)取樣組織切片
(7)病理判讀
熱原試驗 Pyrogen Study
法規 USP151
1. 試驗物質萃取:單一萃取
2. 試驗組別:
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:3隻
5. 投予途徑:單次投予
6. 投予頻率:單次投予
7. 試驗期:一天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)投藥後,當天進行體溫監測,評估熱原發生與否
皮下植入試驗 Subcutaneous Implantation Study
法規 ISO10993-6
1. 試驗物質植入:依法規規定尺寸 (瑞德生技專業評估)
2. 試驗組別:
對照組-陰性對照
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:3隻
5. 投予途徑:手術皮下植入
6. 投予頻率:單次投予
7. 試驗期:(瑞德生技專業評估)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)手術後,每天觀察動物狀況、試驗期間動物體重測量
(3)犧牲後剖檢觀察
(4)取樣組織切片
(5)病理判讀
肌肉植入試驗 Muscle Implantation Study
法規 ISO10993-6
1. 試驗物質植入:依法規規定尺寸 (瑞德生技專業評估)
2. 試驗組別:
對照組-陰性對照
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:3隻
5. 投予途徑:手術肌肉植入
6. 投予頻率:單次投予
7. 試驗期:(瑞德生技專業評估)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)手術後,每天觀察動物狀況、試驗期間動物體重測量
(3)犧牲後剖檢觀察
(4)取樣組織切片
(5)病理判讀
骨植入試驗 Bone Implantation Study
法規 ISO10993-6
1. 試驗物質植入:依法規規定尺寸 (瑞德生技專業評估)
2. 試驗組別:
對照組-陰性對照
3. 試驗動物:紐西蘭白兔
4. 動物隻數:5隻
5. 投予途徑:手術股骨植入
6. 投予頻率:單次投予
7. 試驗期:(瑞德生技專業評估)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)手術後,每天觀察動物狀況、試驗期間動物體重測量
(3)犧牲後剖檢觀察
(4)取樣組織切片
(5)病理判讀
28天連續口服試驗 Repeated Dose 28-day Oral Toxicity Study
法規 OECD 407
1. 試驗物質劑量:(瑞德生技專業評估)
2. 試驗組別:
試驗組-中劑量
試驗組-高劑量
對照組-陰性對照
3. 試驗動物:SD 大鼠
4. 動物隻數:80隻(40公40母)
5. 投予途徑:管餵口服
6. 投予頻率:每天
7. 試驗期:28天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)毒性觀察與評分:每天觀察外觀與表現,每週記錄攝食與體重變化,犧牲後解剖觀察
(3)血清生化分析
(4)血液分析
(5)尿液分析
(6)組織切片
(7)病理判讀
急性口服毒試驗(極限口服) Acute Oral Toxicity Study(limit)
法規 OECD 420, OECD 423
1. 試驗物質劑量:(瑞德生技專業評估)
2. 試驗組別:
對照組
3. 試驗動物:SD 大鼠
4. 動物隻數:20隻(10公10母)
5. 投予途徑:管餵口服
6. 投予頻率:單次投予
7. 試驗期:14天 (不含檢疫及適應期)
8. 評估項目:
(1)每日臨床觀察
(2)毒性觀察與評分:每天觀察外觀與表現,每週記錄攝食與體重變化,犧牲後解剖觀察